商务合作:400-808-2393

LANGUAGE

医疗网络

学术讲堂

第3章 人卵泡的体外培养—卵巢组织的来源、特性和利用

  卵巢皮质储存着大量的原始卵泡,是体外成熟培养中未成熟卵子的主要来源。研究用的人卵巢皮质经主要获得途径有:经病人同意在子宫切除术或者卵巢切除术中(12,46,47)、绝育女性做腹壁部分切除术或者腹腔镜手术中(14,45,46)和在剖宫产时做卵巢活检获得。

  除了这种有限的卵巢组织第三方辅助介入,变性者(女性变男性)也是卵巢皮质组织的一个潜在来源(62)。胎儿卵巢(妊娠晚期流产女婴)和青春期前的女孩卵巢组织单位面积的原始卵泡最多,也是卵泡的最佳来源。成年女性病人卵巢皮质中原始卵泡的分布不均匀且随着女性年龄增加的卵泡密度降

  低,因此在研究比较不同培养条件对人卵泡的影响时,胎儿卵巢和青春期前的女孩卵巢组织被普遍认为原始卵泡的最理想的来源。

  胎卵巢和青春期前的女孩卵巢组织中丰富的原始卵泡确实能更好地说明不同培养条件对卵泡的影响。因此,许多研究偏爱将胎儿卵巢组织作为卵泡来源(16~18)。

shutterstock_522013642

  由于人和大型动物整个卵巢体积较大,将其整个培养时营养物质不能在卵巢不同区域顺利传导,气体交换困难且随着代谢废物的积聚经常导致卵巢坏死,因此不能将整个卵巢进行培养。鉴于此,经常将大型哺乳动物卵巢皮质切成薄片进行培养。培养卵巢组织的优点在于其不仅能保存结构完整的组织,还使得卵巢间质和卵泡能进行相互的物理作用。

  分离卵巢中卵泡的方法

  卵巢中分离得到的早期卵泡也可以用来做体外培养的研究。目前分离卵泡主要有两种方法,即机械法(显微解剖法)和酶消化法。用酶部分或者完全消化卵巢组织后就可以分离卵泡,所用的酶有蛋白水解酶如胶原酶( collagenase)I、胶原酶Ⅱ或Ⅸ(45,47,63,64),也可以用胶原酶结合脱氧核糖核酸酶( deoxyribo-

  nuclease)(47)和释放酶( liberase)(65)。机械法分离卵泡就是用细针将含有紧密纤维的卵巢间质组织切割,使卵泡分离出来。经酶部分消化后的卵巢组织再用机械方法分离卵泡往往更容易。但不管酶消化还是机械法都有一定局限性。由于大型哺乳动物卵巢间质

  含有纤维,使得机械法分离卵泡费力费时,而且机械法分离的卵泡存活率一般很低。酶消化法主要的缺点是破坏卵泡的完整性,经常使基底膜(basal membrane)泡的体外培养膜细胞( heca cell)破裂从而导致卵丘卵母细胞通讯及物质交换受阻,而且这种破坏经常使体外培养的卵泡发育力低下。虽然卵泡分离存在很多不足之处,但养分离的卵泡意义重大。分离卵泡的培养可以帮助我们了解在卵巢组织中卵泡的物质组成,还可以避免培养没有卵泡的卵巢皮质薄片。但要证实在人和大型动物卵巢中分离卵泡的安全性是一项艰难的工作。目前,只是在啮齿类动物模型一小鼠中验证了分离卵泡的安全性。经酶消化法(66)或机械法(67)分离的小鼠次级卵泡均能在体外培养得到具有发育潜力的成熟卵子,并最终得到了活产的小鼠幼。

  (来源:《不孕症与辅助生殖》)